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MTT大全

MTT大全

2007-11-20

这段做MTT走了不少弯路,后来看了园子里有许许多多的建议和

指导,再做时结果好了很多,心里很是感激,于是把众多的帖子

进行了总结,希望对后来者有所帮助!同时感谢各位前辈的良帖!!

MTT大汇总

实验前应明确的问题

1.选择适当的细胞接种浓度。一般情况下,96孔培养板的一内贴

壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异

很大,因此,在进行MTT试验前,要进行预实验检测其贴壁率、

倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线,确定试验中每

孔的接种细胞数和培养时间,以保证培养终止致细胞过满。这样,

才能保证MTT结晶形成酌量与细胞数呈的线性关系。否则细胞数

太多敏感性降低,太少观察不到差异。

2.药物浓度的设定。一定要多看文献,参考别人的结果再定个比

较大的范围先初筛。根据自己初筛的结果缩小浓度和时间范围再

细筛。切记!否则,可能你用的时间和浓度根本不是药物的有效

浓度和时间。

3. 时间点的设定。在不同时间点的测定OD值,输入excel表,

最后得到不同时间点的抑制率变化情况,画出变化的曲线,曲线

什么时候变得平坦了(到了平台期)那个时间点应该就是最好的

时间点(因为这个时候的细胞增殖抑制表现的最明显)。

4.培养时间。200ul的培养液对于10的4~5次方的增殖期细胞来

说,很难维持68h,如果营养不够的话,细胞会由增殖期渐渐趋向

G0期而趋于静止,影响结果,我们是在48h换液的。

5.MTT法只能测定细胞相对数和相对活力,不能测定细胞绝对数。

做MTT时,尽量无菌操作,因为细菌也可以导致MTT比色OD值的

升高。

6.理论未必都是对的。要根据自己的实际情况调整。

7.实验时应设置调零孔,对照孔,加药孔。调零孔加培养基、MTT、

二甲基亚砜。对照孔和加药孔都要加细胞、培养液、MTT、二甲基

亚砜,不同的是对照孔加溶解药物的介质,而加药组加入不同浓

度的药物。

8.避免血清干扰。用含15%胎牛血清培养液培养细胞时,高的血

清物质会影响试验孔的光吸收值。由于试验本底增加,会试验敏

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